2018年21期

拟南芥SSP1基因GFP载体构建及GFP植株筛选

作  者 吴席,樊婷婷,方雪,徐洁娜,曹树青
第一作者 吴席
作者单位 合肥工业大学食品科学与工程学院,安徽合肥
卷  号 46
发表年份 2018
发表刊期 21
发表页面 119-121
关  键  字 拟南芥;SSP1;载体;GFP转基因植株,
摘  要 [目的]以野生型拟南芥为材料构建SSP1基因GFP载体及GFP转基因植株。[方法]通过提取野生型拟南芥的RNA,反转录成为cDNA,并以cDNA为模板,利用高保真酶,进行SSP1基因的克隆,将克隆所获得SSP1基因和pXB94-GFP质粒进行双酶切,利用T4-DNA ligase进行连接,并转化进大肠杆菌DH5α感受态细胞中,通过菌落PCR和测序获得阳性单克隆。通过质粒抽提试剂盒提出构建好的重组质粒,并将其转入农杆菌GV3101中,通过菌落PCR鉴定出阳性单菌落。将获得的阳性菌通过花序浸染法转入野生型拟南芥中,并通过抗性筛选获得阳性植株。[结果]克隆SSP1基因成功,菌落PCR显示SSP1基因成功连接到pXB94-GFP质粒上并成功转入农杆菌中,抗性筛选获得了SSP1-GFP转基因植株。 [结论]成功获得SSP1-GFP转基因植株,为接下来进一步研究SSP1基因功能奠定了基础。
附  件 拟南芥SSP1基因GFP载体构建及GFP植株筛选
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