2018年12期

米虾鞣化激素的表达特征分析及体外合成

作  者 任丽琦,翁洁羊,王鑫,孙金生,李冉
第一作者 任丽琦
作者单位 天津师范大学生命科学学院,天津市动植物抗性重点实验室,天津
卷  号 46
发表年份 2018
发表刊期 12
发表页面 112-117
关  键  字 米虾;鞣化激素;原核表达;组织表达;实时荧光定量PCR,
摘  要 [目的]观察米虾的胚胎发育过程。制备米虾发育过程中鞣化激素(Bursicon)的α和β这2个亚基基因蛋白并探讨其在不同组织中的表达特征。[方法]利用光学显微镜观察米虾的胚胎发育过程。根据转录组提示,PCR扩增2个亚基基因的编码区。目的片段经双酶切后分别连入载体pET-28a-c(+)中,构建表达载体pET-28a-α、pET-28a-β。重组质粒转入Rosetta表达菌后用IPTG诱导其表达。采用实时荧光定量PCR检测bursicon-α和bursicon-β在米虾的眼柄、心、胸神经节和腹神经节4个组织中的表达差异。[结果]米虾胚胎发育阶段包括卵裂期、囊胚期、原肠期、前无节幼体期、后无节幼体期、复眼色素形成期以及蚤状幼体期共7个阶段。SDS-PAGE凝胶电泳检测发现体外原核系统能够成功表达Bursα和Bursβ,二者的相对分子质量约为15 kD。此外表达特征分析显示bursicon-α和bursicon-β在米虾腹神经节中的相对表达量最高,胸神经节中的相对表达量次之,在眼柄和心中的相对表达量较低。[结论]米虾中鞣化激素的2个亚基基因主要是在其腹神经节中表达,属于神经多肽激素,能够分泌到血淋巴中发挥调节作用;体外原核表达系统获得重组蛋白Bursα和Bursβ,为进一步研究其功能及应用于生产奠定了基础。
附  件 米虾鞣化激素的表达特征分析及体外合成
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